高压蒸汽灭菌是利用热蒸汽穿透细胞使其蛋白质等物质变性而起到灭菌的作用的，影响其灭菌效果的因素有：
1、冷空气是否排尽(灭菌器灭菌之前要排冷空气，一般是排气5min)
2、灭菌温度和压力是否达到要求
3、待灭菌物品摆放是否过于紧密(影响蒸汽的穿透，待灭菌物品需要装入容器时，如培养基，塞子要有透气效果，如棉球，不能密封)
4、压力蒸汽是否维持在要求范围内(自动控温的灭菌器可以自动维持在设定温度，手动的则需要认真操作，温度过低，灭菌效果不好，温度过高，营养成分损失严重)
5、可以采用边灭菌边排气的方法，即在达到灭菌温度压力后，关掉排气阀时，不将排气阀关死，留一小缝继续排气，这样可以将没排完的冷空气继续排完，冷凝水与排气阀为同一管道是还能将冷凝水排除)
高压蒸汽灭菌的原理和注意事项：
第一，无菌包不宜过大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态
第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果
第三，定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周为宜。高压蒸汽灭菌效果的监测：有以下三种方法
高压蒸汽灭菌监测
一：工艺监测，又称程序监测。根据安装在灭菌器上的量器(压力表、温度表、计时表)、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行
二：化学指示监测。利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数
